CRISPR/EGE™ 기반 유전자 편집

CRISPR(clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats) 는 세균이 침입한 바이러스성 DNA와 다른 외부 DNA를 방어하는 기제입니다. Streptococcus pyogenes 로부터 얻어진CRISPR/Cas9 시스템이 현재 가장 보편적으로 사용되고 있습니다.

Cas9 단백질은 먼저 crRNA(CRISPR RNA) 와 결합하며, tracrRNA(TRACER RNA) 와 복합체를 형성하여 목표로 하는 서열에 최종 결합하여 RNA-DNA 복합체를 생성합니다. 이 복합체는 결국 DNA의 이중 나선을 절단합니다. CrRNA는 목표로 하는 DNA 서열을 인지하고, tracrRNA 는 Cas9의 활성에 필수적인 요소를 보존하고 있습니다. 

실험실에서 유전자 편집 과정을 더욱 단순화 하기 위해서, crRNA 와 tracrRNA 는 합쳐져서 sgRNAs(Single Guide RNAs) 를 생성합니다. 목표로 하는 유전자는 sgRNA 와 Cas9 단백질을 모두 발현하는 플라스미드를 보유한 transfecting 세포에 의해서 편집되게 됩니다.CRISPR/Cas9 서비스는 세균, 효모, 식물, 생선, 포유류 등에 성공적으로 적용된 바 있는, 가장 효율적인 유전자 편집 기술입니다. 

외부 DNA와 목표로 하는 게놈 사이에서의 상동재조합(homologous recombination) 효율은 표준 CRISPR/ Cas9 기술을 사용했을 때 매우 낮습니다. 바이오사이토젠은 이러한 단점을 극복하기 위하여, EGE™ (Extreme Genome Editing) 시스템을 개발하였고, 이는 기존 CRISPR/Cas9 기술에 비해 상동재조합의 효율이 10~20배 증가하였습니다. 이는 EGE™ 시스템을 적용한 유전자 편집을 더욱 빠르고 편리하게 만들었습니다. EGE™ 시스템은 어떠한 게놈 위치에서라도 정확하게 DNA 서열을 편집할 수 있으며, 이는 다양한 유전자 재조합 마우스 모델을 제작하는데 있어서 매우 적합합니다.

장점:

High SpeedThe F0 generation positive mouse can be obtained in two months at the earliest, while the F1 generation can be obtained in five months
Zero RiskSupported by a strong production platform, customers will be fully refunded if the project fails
High EfficiencyCompared with standard CRISPR/Cas9 technology, the efficiency of homologous recombination mediated by the EGE™ system is increased by 10-20 fold
High QualitySouthern blot screening minimizes follow-up experimental risks caused by random insertions
DiversificationConventional knockout, conditional knockout, and gene knockin, etc.
No Species LimitationCell line, mouse, rat, pig, monkey, and zebra fish, etc.

서비스 과정:


技术危机

엄격한 품질 관리:

유전자의 무작위 삽입을 골라내기 위한 Southern blot

CRISPR/Cas9 기반 EGE™ 프로젝트 중 32%에서 유전자의 무작위 삽입이 일어난다는 것이 통계 분석으로 증명되었습니다. 가장 신중하게 디자인된 CRISPR 기술을 사용하더라도 해당 동물 모델 중에서, 14%는 교배 방식으로도 걸러낼 수 없습니다. Southern blot 분석은 이러한 무작위 삽입을 찾아내는 중요한 방법입니다. 바이오사이토젠은 제작하고 있는 모든 동물 모델에서 이러한 무작위 삽입이 없도록 Southern blot 분석을 시행하고 있습니다.


技术严格质量控制

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