이중특이성항체의약효연구를위한인간화 CD3e 마우스

인간 CD3를 타겟으로 하는 많은 항체들은 마우스의 CD3와 교차반응하지 않기 때문에 이런 항체를(이중특이성 항체 포함) in vivo 에서 테스트 하는 것은 매우 어렵습니다. 바이오사이토젠의 B-hCD3ε 마우스는 인간 CD3ε의 세포막 외부 단백질로 마우스의 CD3ε를 대체한 제품으로서, 마우스에서 항 인간 CD3 항체(이중특이성 항 인간 CD3 항체 포함)를 in vivo에서 직접적으로 효능평가가 가능한 매우 유용한 모델입니다. 이 B-hCD3ε는 다음과 같은 특징으로, 이중 특이성 항체의 전임상 평가를 가능하게 합니다. 

  1. B-hCD3ε 마우스에서 인간 CD3ε 단백질이 발현되며, 마우스 CD3ε 세포는 결손됩니다.

  2. B-hCD3ε 에서는 T 세포가 정상적으로 분화합니다.

  3. B-hCD3ε의 비장, 흉선, 림프절, PBMC (말초 혈액 단핵세포)에서의 T 세포들은 WT 마우스와 동일합니다.

  4. B-hCD3ε 마우스에 MC38 암세포를 이식한 후 항 마우스 PD-1 항체를 투여하면 높은 정도의 암 억제 효과를 보이고, 이는 B-hCD3ε의 T 세포 기능이 문제 없음을 증명합니다.

  5. B-hCD3ε에 항 인간 CD3ε 항체인 OKT3를 투여하면 T 세포의 감소가 일어나고, 이는 인간 CD3ε 단백질의 기능성을 증명합니다.

  6. 인간화 B-hCD3ε 마우스에 항 인간 CD3ε를 투여했을 시, in vitro 에서도 T 세포의 분화와 사이토카인의 생성을 관찰할 수 있습니다. 

가장 중요한 점은, B-hCD3ε는 blinatumomab 에 용량 의존적으로 인간화 마우스 대장암 세포인 MC38-hCD19의 성장을 억제한다는 것 입니다.

CD3ε 마우스 모델

B-hCD3ε 모델에서, 마우스의 CD3ε 세포막 바깥 부분의 단백질의 인간 CD3ε로 대체되어 있습니다. 우리는 ES/HR 기술을 사용하여 인간 CD3ε의 exon 2와 exon7 사이의 게놈 DNA로서 마우스에서 동일 위치인 exon 2 와 exon 6를 대체하였습니다.

Case 1 : 이중 특이성 항체의 in vivo 효능 평가

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Murine colon cancer MC38-hCD19 cells were subcutaneously implanted into B-hCD3ε mice. Mice were divided into control and treatment group dose(n=6) when the tumor size was approximately 150±50 mm3. High doses of hCD3ε antibody (Blinatumomab) significantly inhibited tumor growth, confirming that the B-hCD3ε mouse model is a powerful tool for in vivoanti-hCD3ε based bi-specific antibody efficacy evaluation. (A) Tumor average volume ± SEM, (B) Mice average weight ±SEM.

Case2

3.1.2.4-case-2.png

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The ratio of T cells in spleen and blood were analyzed at 24h, 72h and 168h by flow cytometry.


Case3

Murine colon cancer MC38 cells were subcutaneously implanted into C57BL/6(A) and B-hCD3e (B) mice. Mice were grouped when the tumor size was approximately 150±50mm(n=5). In the humanized mouse model, mPD-1 antibody significantly inhibited tumor growth, indicating normal T cell function. More aggressive tumor growth after anti-hCD3 antibody treatment was observed. This may result from activation induced cell death (AICD). As a result, the B-hCD3e mouse model is a powerful tool for in vivo CD3 antibody pharmacological efficacy studies.

인간화종양세포주

Humanized Tumor Cell Lines

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