바이오사이토젠은 세포에 기반하거나 생화학적 분석을 포함하는 다양한 범위의 in vitro 서비스를 제공하고 있습니다. 세포에 기반한 in vitro 서비스는 조직에서 떼어낸 세포의 분석과 배양된 세포의 분석을 모두 포함합니다. 조직에서 떼어낸 세포의 분석은 T 세포의 활성 정도, MLR (mixed lymphocyte reaction), antigen recall, T세포와 NK 세포의 독성, 수지상 세포 활성, macrophage-based phagocytosis, ADCC (antibody-dependent cellular cytotoxicity ), CDC (complement-dependent cytotoxicity) 와 검체의 결합 능력 테스트를 포함합니다. 다중 사이토카인 방출 정량화와 FACS에 기반한 세포성 마커의 검출은 자주 사용되는 분석 방법입니다. 한편, 배양 세포에 기반한 분석은, 세포 표면 마커나 타겟의 표현 분석, 검체의 결합 능력 분석, 세포 증식과 사멸의 다각도 분석, 형광과 발광을 이용한 시각화된 분석을 포함합니다. 바이오사이토젠은 또한 SPR(surface plasmon resonance) 생화학적 결합 분석이나 친화력 분석도 수행하고 있습니다.

in vitro 서비스 리스트

  • 약물의 세포 결합 능력 분석

  • 약물과 인간화 마우스 비장 세포의 결합 능력 분석

  • 약물의 수용체등에 대한 차단 효과 테스트 

  • In vitro 활성 테스트

  • MLR에 기반한 In vitro 활성 테스트

  • In vitro 세포사 분석(ADCC, CDC)

  • 용혈/혈액응고 분석

세포 표면 항원 결합 능력 분석 : MC38-hPD-L1 에서의 인간 PD-L1 항체 분석

Cell-Surface-Antigen-Binding

MC38 is a mouse colon cancer cell line. MC38-hPD-L1 is an engineered MC38 cell line expressing human PD-L1 in place of mouse PD-L1. Analysis of PD-L1 expression with anti-mouse and anti-human PD-L1 antibodies by flow cytometry demonstrates that human PD-L1 indeed is expressed  only in MC38-hPD-L1, whereas mouse PD-L1 is only expressed in the wild type MC38.

Case2: ADCC(Antibody-dependent Cellular Cytotoxicity) 분석

抗体依赖性细胞

Ratio=(CFSElow cell /CFSEhigh cell)

Specific Cytotoxicity=[1-(No-drug control Ratio/Experimental Ratio)]*100%

特异性细胞毒性

Fig 1. ADCC with anti-human CTLA4 antibody

In this assay, human PBMCs were used as effector cells. Jurkat- hCTLA4 cells were labeled with high concentration of CFSE as the target cells, and Jurkat WT cells labeled with low concentration of CFSE as internal controls. Effector cells, target and internal control cells were incubated for 18 hours in the presence of varied concentrations of anti-human CTLA-4. Specific Cytotoxicity=[1-(No-drug control Ratio/Experimental Ratio)]*100%;  Ratio=(CFSElow cells /CFSEhigh cells).

Case 3: CDC (Complement-dependent cytotoxicity) 분석

Rituximab으로 유도된 CDC 분석. Raji 세포는 다양한 농도의 rituximab 과 혼합되어 배양액에서 2시간 동안 배양되었습니다. 배양액에서의 LDH 농도 변화는 세포 독성의 표지로서 결정되었습니다. Rituximab는 Raji 세포에 대하여 높은 정도의 CDC 활성을 나타내었습니다. 

Cytotoxicity%=(Experiment-Spontaneous)/(Max release)*100%

Case 4: T 세포 활성 분석

T细胞活化试验

Human PBMCs (0.1 million) were added into wells of a round bottom 96-well culture plate with SEB (10 ng/mL) and varied amount of Ipilimumab or isotype control, and incubated for 48 hours. Release of IL-2 was determined by ELISA. The results show that ipilimumab dose-dependently potentiated SEB stimulated IL-2 production by PBMCs.

Case 5: MLR (Mixed Lymphocyte Reaction) 분석

混合淋巴细胞反应

Human T cells and allogeneic DCs were mixed in the ratio of 5:1 in wells of a round bottom 96-well culture plate in the presence of varied concentration of nivolumab or isotype control antibody and incubated for 72 hours. Release of IFN-γ was determined by ELISA. The results show that nivolumab dose-dependently potentiated IFN-γ production in mixed lymphocyte reaction (MLR).

Case 6: 적혈구 침전 분석

Sediment-Test.png

Two percent (2%) red blood cells (RBC) was incubated with anti-human CD47 antibody of varied concentrations from 0 ng/mL to 10 ng/mL. Erythrocyte sediment was detected after 0.5 hours. RBC would normally precipitate to the bottom without toxic or pathological interference. As shown in the panel, toxic anti-CD47 antibody (top) prevented RBC sediment at lower threshold concentration (indicated by the red bars) than the less toxic anti-CD47 antibody (bottom).

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