바이오사이토젠은 독립적으로나, 혹은 in vivo 효능 평가를 뒷받침하기 위한 포괄적인 약력학 평가 서비스를 제공합니다.

  • 종양 및 기타 조직에서의 림프절, 골수, 세포 표면과 내부의 마커들에 대하여 FACS 분석을 이용한 면역 세포 프로파일링

  • 다중 기술을 사용한 사이토카인/케모카인 프로파일링

  • RNA 발현 프로파일링

  • IHC(Immunohistochemistry)

  • RO (Receptor Occupancy) assay

Case 1: B-hCD137(4-1BB) 마우스의 MC38 종양세포에서 종양 투과성 면역 세포 프로파일링

종양 투과성 면역 세포는 종양 면역 연구에서 자주 다뤄지고 있습니다. 이것은 종양 투과성 림프구들과 (T세포, B세포, NK세포) 단핵, 다형핵의 골수 세포(마크로파지, 수지상세포, 대식 세포, 호중구, 호산구, 호염기구 등)을 포함합니다. 어떤 세포는 암 성장을 촉진하고, 다른 특정 세포들은 억누르는 역할을 하며, 이는 아래의 모식도에 정리되어 있습니다. 이들의 구성은 암의 종류나 치료제의 개입 정도에 따라서 변화합니다. 종양 투과성 면역 세포 구성의 탐색은 종양 성장을 조절하는 세포적 메카니즘을 밝혀내는데 중요한 역할을 합니다. 치료제의 개입에 의해서 특정한 세포 종류의 변화가 있다면, 이를 약력학 마커로서 사용이 가능합니다.

바이오사이토젠은 인간화 마우스 모델과, 면역 결핍 마우스 모델을 포함한 다양한 마우스 모델에서, TIL 프로파일링을 비롯한 종양 투과성 면역 세포 프로파일링 서비스를 고품질, 다채색의 FACS 결과로서 제공합니다.

癌症

Typical flow cytometry analysis scheme for tumor infiltrating immune cells using B-h4-1BB (CD137) mice


典型流式细胞仪

001png-768x1011.png

Flow cytometry analysis of tumor infiltrating immune cells. MC38 cells (0.5 M) were subcutaneously inoculated into B-h4-1BB mice, where the extracellular domain of human 4-1BB (CD137) replaces that of mouse 4-1BB via genomic knock-in. Grouping (n=3) and dosing started when tumor volume reached approximately 300 ± 50 mm3. Tumors were collected for TIL profiling 2-4 days after one dose of anti-human 4-1BB antibody (Ab1, Ab2) at 3 mg/kg at day 0.

Antibody Ab1 treatment led to marked decrease of Treg cells and increase of CD8/Treg ratios 2-4 days post dosing. Expression of human 4-1BB in CD4, CD8, Treg, and CD11b cells was also decreased significantly after Ab1 treatment. In contrast, treatment of antibody Ab2 resulted in no change in Treg or CD8/Treg ratios and less changes in 4-1BB expression in CD4 and Tregs. Ab2 did lead to significant decrease of 4-1BB in CD11b+ cells. The results suggest that Ab1 has a more favorable anti-tumor PD profile in MC38 tumors via reducing the Treg population in tumor.

  1. Luen SJ, Savas P, Fox SB, et al., Tumour-infiltrating lymphocytes and the emerging role of immunotherapy in breast cancer. Pathology. 2017; 49(2):141-155.

Case 2: B-hCD40마우스에서의 사이토카인 프로파일링

사이토카인은 다양한 세포에서 분비되는 수용성의 저분자 단백질을 지칭하는 표현입니다. 이는 인터루킨, 인터페론, 케모카인, TNF등을 포함하며, 체내의 면역 반응 조절에 있어서 중요한 역할을 수행합니다. CD40은 공동 자극성 수용체로 항원 표시 세포에서 주로 발현됩니다. CD40은 T 세포에 있는 자신의 리간드 CD154이나 길항성 항 CD40 항체와 결합하여 항원 표시 세포와 T 세포를 모두 활성화 시키고, 다양한 사이토카인의 분비를 증가시킵니다. 바이오사이토젠은 마우스의 CD40 단백질이 인간의 것으로 치환된 B-hCD40 마우스를 제작하였습니다. 이 모델은 항 인간 CD40 항체인 selicrelumab의 마우스 MC38 종양 모델에서의 효능 평가로서 검증되었습니다. (A, B) 다른 항 CD40 항체가 투여된 MC38/B-hCD40 모델에서의 다중 사이토카인 분석은 이들 항체들의 다양한 사이토카인 프로파일을 보여줍니다. (C)  CD40에 기반한 치료법을 개발할 때, 사이토카인에 의하여 유도된 독성이 가장 중요한 임상적 안전에 대한 고려 요소임을 생각해 본다면, 사이토카인 프로파일링은 사이토카인 매개 독성이 감소된 효능 높은 항 인간 CD40 항체를 개발하는데 유용하다고 할 수 있습니다.

鼠结肠癌

Murine colon cancer MC38 cells were subcutaneously implanted in homozygous B-hCD40 mice. Mice were grouped when the tumor sizes reached approximately 150±50 mm3 (n=5). Selicrelumab (anti-human CD40 antibody) significantly inhibited tumor growth, validating that the B-hCD40 mice are a useful model for in vivo pharmacology studies of anti-human CD40 antibodies. Tumor volume: mean ± SEM (A).  Body weight: mean ± SEM (B).

Cytokine profiles after anti-human CD40 antibody treatment of MC38-bearing B-hCD40 mice. Multiplexed cytokine detection was performed with LEGENDplexTM (Biolegend). Anti-human CD40 antibody treatments led to significant increase of IFN-γ, TNF-α, MCP-1, and IL-27. Note that the two antibodies gave different profiles. Not only could the difference in cytokine profiles provide insights on the mode of action by individual anti-human CD40 antibodies, but also they could be used as PD biomarkers to inform selection of safe anti-CD40 therapeutics.

Case 3: B-hCD3e의 특성을 통하여 확인한 림프구 중 CD3+ T 세포의 비율이 AICD (antibody-induced cell death)를 위한 유용한 PD 마커로서의 의미


B-hCD3e-小鼠

Murine colon cancer MC38 cells were subcutaneously implanted in C57BL/6 (A) and B-hCD3e (B) mice. Mice were grouped when the tumor size reached approximately 150 ± 50mm(n=5). The mPD-1 antibody significantly inhibited tumor growth, whereas the specific CD3 mouse antibody led to increased tumor growth. The enhanced tumor growth by anti-human CD3e antibody was probably due to antibody-induced cell death (AICD), as anti-human CD3e treatment resulted in loss of CD3 T cells in blood and spleen (C). These results indicated B-hCD3e mice are responsive to anti-human CD3e modulation and validated the B-hCD3 mouse model as a useful tool to study anti-human CD3e antibody-based therapy.


The ratio of B cells and T cells in the blood of B-hCD3e mice was detected by flow cytometry (C). Lymphocytes were isolated from peripheral blood at the 48 hours. In the anti-human CD3e antibody treated group, the proportion of CD3 T cells was significantly decreased. This depletion was specific to anti-human CD3e because anti-mouse CD3e, anti-mouse PD-L1, or an IgG control antibody did not show depletion of T cells (C, right). Further, no change in B cells as percent of leukocytes was also not changed (C, left). This observation was consistent with activation induced cell death (AICD).

脾表

 

Table 1. Group and treatment information.

Strains of miceGroupTreatment
B-hCD3eG1hCD3 antibody (OKT3)
G2CD3/CD19 Bispecific antibody
G3Blinatuomomab
G4PBS
C57BL/6G5mCD3 antibody (145-2C11)
G6PBS

The ratio of T cells in spleen and blood were analyzed at 24h, 72h and 168h by flow cytometry.

Back to top
카카오톡 상담하기