RenNano 마우스는 in vitro에서 인간화가 필요 없는 중쇄 단항체(HCAbs)를 생성하여, 더 빠르고 비용 효율적인 프로세스를 제공합니다. RenNano 유래 HCAbs는 서열 다양성, 최적의 친화성 및 유리한 약리학적 특성을 보여줍니다.
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RenNano 마우스의 TFR1, 4-1BB, ALB에 대한 면역 반응. TFR-1과 4-1BB(막 항원)으로 면역한 RenNano 마우스의 혈청은 희석되어 항원 발현 CHO 세포와 인큐베이션되었습니다. 형광 표지된 2차 항체를 사용하여 CHO에 결합한 HCAb를 라벨링하고, 흐름 세포 분석을 통해 평균 형광 강도(MFI)를 측정하여 항원 특이적 HCAb의 titre를 나타냈습니다. ALB(분비 항원)로 면역한 RenNano 마우스의 혈청은 희석되어 형광 표지된 2차 항체와 인큐베이션되었습니다. ELISA를 사용하여 OD450을 측정하여 항원 특이적 HCAb의 titre를 나타냈습니다.
RenNano 마우스 유래 HCAb는 다양하며, 많은 수가 긴 CDR3 영역을 포함합니다. 항원 특이적 HCAb는 그들의 중쇄 종계 유전자 사용과 CDR3 길이에 따라 분석되었습니다. 분석 결과는 광범위한 IGHV 종계 다양성을 보여줍니다. 또한, 관찰된 대부분의 CDR3 길이는 12개 아미노산을 넘었으며, 일부는 17개 아미노산 이상이었습니다.
68개의 정제된 RenNano HCAb의 8개 타겟(4-1BB, TROP2, IL3RA, OX40, Nectin-4, ROR1, PSMA, DLL3)에 대한 친화도는 SPR로 테스트되었습니다. 대부분의 HCAb에서 KD는 10-6 ~ 10-10 M 범위였습니다.
RenNano 마우스의 B세포 발달 및 분화 패턴. RenNano 마우스는 외부 림프기관(비장, SP, 림프절, LN)에서 B세포 비율이 야생형 마우스 또는 RenMab 마우스와 비교하여 비슷합니다. RenNano 마우스의 비장에는 야생형 마우스나 RenMab 마우스와 비교하여 여포 B세포(FO-B)와 가장자리지대 B세포(MZ-B) 비율이 비슷합니다.
RenNano HCAb의 물리화학적 특성 분석. RenNano HCAb는 한 번의 정제 후 높은 순도를 보였습니다(A). HCAb는 HIC-HPLC 및 CIC-HPLC에서 짧은 유지 시간을 보여주며, 이는 뛰어난 친수성과 특이성을 나타냅니다(B, C). RenNano HCAb는 또한 우수한 열 안정성을 보였습니다(D).
