자가면역성 및 염증성 질환

다발성 경화증(EAE) 마우스 모델

바이오사이토젠(Biocytogen)은 MOG(뇌척수염 관련 올리고덴드로사이트 당단백질) 유도형 실험적 자가면역성 뇌척수염(EAE) 마우스 모델을 구축했습니다. 이 모델은 중추신경계 염증, 탈수초 및 운동 기능 손상을 포함한 인간 다발성 경화증(MS)의 주요 병리학적 특징을 재현하는, 검증이 잘 된 전임상 MS 모델입니다. 이 자가면역 질환 모델은 전임상 다발성 경화증 연구, 기전 연구 및 MS 관련 치료제와 면역조절 치료제의 효능 평가를 위한 신뢰할 수 있는 생체 내 플랫폼을 제공합니다.
Multiple Sclerosis (EAE)

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  • 다발성 경화증(EAE) 마우스 모델 개요
  • 결과

출판물

    다발성 경화증 (EAE) 마우스 모델 소개

    다발성 경화증(MS, Multiple Sclerosis)은 중추신경계(CNS, Central Nervous System)의 만성 자가면역성 염증 질환으로, 뇌염, 탈수초 및 진행성 신경 기능 장애를 유발합니다. 임상 증상으로는 근육 경직 및 마비, 시력 장애, 감각 상실, 운동 실조가 포함되며, 이는 대개 재발적으로 나타납니다. 다양한 다발성 경화증 동물 모델 중에서 실험적 자가면역성 뇌척수염(EAE, Experimental Autoimmune Encephalomyelitis) 모델은 인간 MS에서 관찰되는 병리학적 염증과 탈수초를 잘 재현하기 때문에 가장 널리 사용됩니다.

    영장류 이외의 설치류(특히 EAE 마우스 모델과 EAE 랫트 모델)에서는 척수 균질액, 수초염기성 단백질(MBP), 단백질지질단백질(PLP), 수초올리고덴드로사이트 당단백질(MOG) 등 정제된 수초 단백질을 이용해 질환을 유도할 수 있습니다. 이러한 항원은 수초 특이적 T세포를 활성화시킬 수 있으며, 활성화된 T세포는 혈액-뇌 장벽을 통과하여 축삭손상, 탈수초, 운동기능 상실을 유발하는 염증 캐스케이드를 개시합니다. EAE 모델의 질환 진행 정도는 일반적으로 표준화된 임상 점수 평가와, 국소 탈수초 및 중추신경계(CNS) 염증에 대한 조직병리학적 분석을 통해 평가됩니다.

    바이오사이토젠(Biocytogen)은 약물 효능 평가, 기전 연구 및 면역조절 치료제 개발에 적합한, 검증이 잘 된 전임상 다발성 경화증(MS) 모델인 MOG(수초올리고덴드로사이트 당단백질) 유도형 EAE(실험적 자가면역성 뇌척수염) 마우스 모델을 구축했습니다. 이러한 EAE 모델은 자가면역성 신경염증 연구 및 MS 관련 치료제 발굴을 촉진하기 위한 신뢰할 수 있는 생체 내 플랫폼을 제공합니다.

    결과
    MOG35-55 유도 EAE 프로토콜

    모델 생성 방법: 동물은 0일째에 MOG35-55/CFA 유제를 옆구리(파란 점) 또는 목과 엉덩이(빨간 점)에 피하 주사하고, MOG35-55/CFA 유제 주사 후 2시간 및 24시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 마우스에 투여합니다. 체중과 EAE 점수는 2일마다 기록합니다. 실험 종료 시 척수의 요추 확장부를 수집하여 H&E 및 LFB 염색을 수행합니다.

    Protocol of MOG35-55 induced EAE

    동물: C57BL/6, B-hCD40hFcRn 마우스, 8-10주령, 암컷
    검출 지표: 체중 및 임상 점수(2일마다), H&E, Luxol Fast Blue(LFB) 염색

    Readout
    Included tests Phenotype Body weight
    Clinical score
    Histopathology H&E; LFB
    Optional tests Tissue homogenate Cytokines analysis
    Peripheral blood flow cytometry Flow cytometry assay
    Score Symptoms Description
    0 Normal Hold mouse by the base of the tail. Unaffected, mouse can "helicopter" tail.
    0.5 Tail limpness Hold mouse by the base of the tail. Some loss of tail tone.
    1 Hold mouse by the base of the tail. Complete tail limpness, with no evidence of limb weakness.
    1.5 Limpness No hind limb paralysis, but the hind limbs fail when ambulating on the lid metal grid.
    2 Gait irregularities. Hold mouse by the base of the tail, the hind limbs are curled up.
    Or mouse's head is tilted, it can't keep balance with no hind limb paralysis.
    2.5 Hind limbs paralysis Partial paralysis of hind limbs, waddles upon ambulation, but does not drag limbs.
    Or mouse's head is tilted, and it keep fall down with no hind limb paralysis.
    3 Partial paralysis of hind limbs as evidenced by dragging one limb upon ambulation.
    3.5 Forelimbs paralysis Complete paralysis of both hind limbs, dragging body by forearms, still capable of moving around the cage.
    4 Responsive but not moving/stationary, listless, rapid breathing (consult institutional veterinarian, consider euthanasia).
    4.5 Dead Immobile and unresponsive, moribund (immediate euthanasia recommended).
    5 -
    C57BL/6 마우스에서 MOG35-55 유도 EAE
    MOG35-55 induced EAE In C57BL/6 mice
    Group Onset (day) Peak (day) Incidence
    G1:
    C57BL/6J    		 12 16 5/5
    12 16
    14 17
    12 16
    12 16
    G2:
    C57BL/6N    		 14 18 5/5
    12 14
    14 18
    14 16
    14 18

    그림 1. MOG35-55 유도 EAE. C57BL/6J 및 C57BL/6N (A, B) 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제를 목과 엉덩이(C)에 피하 주사합니다. MOG 주사 후 2시간 및 24시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. 체중과 임상 점수는 2일마다 기록됩니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, n=5.

    B-hCD40/hFcRn 마우스 EAE 모델에서 항 인간 CD40의 효과 평가
    Efficacy evaluation of the anti-human CD40 in B-Hcd40/hFcRn mice of EAE model

    항CD40의 MOG35-55 유도 EAE에 대한 효과. 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제(피하 주사)를 옆구리(파란 점)에 주사하고, MOG 주사 후 2시간 및 48시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. 0일, 4일, 8일에 동종형 대조군 또는 항CD40을 투여합니다. (A) 체중 (B) 임상 점수 (C)는 2일마다 기록됩니다. H&E 및 LFB 염색을 통해 척수의 면역 세포 침투와 탈수초를 평가합니다(D). 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001로 나타냅니다.

    CD40L-Ab는 B-hCD40/CD40L 마우스의 MOG35-55 유도 EAE를 완화시켰습니다.
    CD40L-Ab alleviated MOG35-55 induced EAE in B-hCD40/CD40L mice
    CD40L-Ab alleviated MOG35-55 induced EAE in B-hCD40/CD40L mice 2

    항CD40L의 MOG35-55 유도 EAE에 대한 효과. 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제(피하 주사)를 목과 엉덩이(빨간 점)에 주사하고, MOG 주사 후 2시간 및 48시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. G3(동종형 대조군) 또는 G4(항CD40 항체)를 2주 간격으로 투여합니다. 체중(A) 및 임상 점수(B)는 2일마다 기록됩니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001로 나타냅니다.

    마우스(B-hCD40/CD40L) EAE 모델에서 LFB 및 H&E 염색
    LFB and H&E staining in mouse (B-hCD40/CD40L) EAE model

    항CD40L 항체(내부 개발된 아날로그)는 EAE의 임상 증상을 개선하고 염증과 탈수초를 제어합니다.
    B-hCD40/hCD40L 마우스의 척수는 30일째에 절제하여 Luxol Fast Blue(LFB)(A) 또는 Hematoxylin and Eosin(H&E)(B)으로 염색되었습니다. 대표적인 절편이 나타납니다. 척수의 염증 세포 및 탈수초 점수(C&D). 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001로 나타냅니다.

    MOG35-55 유도 EAE에서 B-hCD40/CD40L 마우스의 사이토카인 분석
    Cytokines analysis in MOG35-55 induced EAE in B-hCD40/CD40L mic

    항CD40L의 MOG35-55 유도 EAE에 대한 효과. 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제(피하 주사)를 목과 엉덩이(빨간 점)에 주사하고, MOG 주사 후 2시간 및 48시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. 항CD40 항체 또는 동종형 대조군은 2주 간격으로 투여됩니다. 연구 종료 시 혈청을 수집하여 사이토카인 수준을 평가합니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, n=6. G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001로 나타냅니다.