Biocytogen은 특정 세포 또는 조직이 EGFP-DTR-Luciferase 유전자를 발현하는 동적 변화나 기능을 직접 관찰할 수 있는 일련의 EGFP-DTR-Luciferase 마우스 모델을 제공합니다.
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클로스트리디움 디프테리아 외독소(DTx)의 헤테로이머 세포독성은 헤파린 결합 EGF 유사 성장 인자 전구체(proHB-EGF, DTR로도 알려짐)에 의한 수용체 매개 내포에 엄격하게 의존한다고 이전에 보여졌습니다. DTR은 DTx의 B 서브유닛과 결합하여 DTx의 내포를 촉진합니다. 세포질로 들어가면 DTx의 A 서브유닛은 연장 인자 2를 불활성화시켜 단백질 합성을 종료하고 목표 세포는 아폽토시스 죽음에 이르게 됩니다. DTx에 의한 세포 제거는 매우 민감하고 효율적이며 세포질 내의 1분자의 활성 DTx A로 진핵 세포를 죽이는 데 충분합니다. 인간 세포는 자연스럽게 DTx에 민감하지만 마우스 세포는 HB-EGF 다형성을 가지고 있어 DTx의 결합이 차단되고 독소에 의한 살상에 대해 내성이 있습니다. 반대로 영장류 proHB-EGF/DTR을 트랜스제닉으로 발현시키면 내성이 있는 마우스 세포가 DTx에 민감해지고 in vivo에서 다용도의 독소 유도 세포 제거 시스템이 제공됩니다. DTR 트랜스제닉 마우스에서의 세포 제거의 특이성과 타이밍은 세포형 특이적 프로모터/인핸서 요소 및 독소 투여 요법에 의해 결정될 수 있습니다. 면역 세포의 제거는 다양한 면역계 구성 요소의 기능적 기여를 밝히는 강력한 방법입니다. 이 기술은 암 면역 요법의 기초 메커니즘을 연구하는 데 특히 유용합니다. 왜냐하면 그것들은 종종 서로 다른 면역 세포 서브셋에 의해 매개되는 여러 메커니즘을 통해 작용하기 때문입니다.
Biocytogen은 일련의 DTR 마우스 모델을 제공합니다. 레포터 유전자 EGFP(강화형 녹색 형광 단백질) 및 루시페라제의 도입은 실험의 시각화 및 정량 분석 능력을 크게 향상시킬 수 있습니다. 이 전략을 통해 연구자는 EGFP-DTR-Luciferase 유전자가 발현되는 특정 세포 또는 조직의 동적 변화 및 기능을 마우스에서 직접 관찰할 수 있습니다. 생체 내 이미징 기술(생물 발광 이미징 등)을 사용하여 연구자는 살아있는 마우스에서 특정 유전자의 발현과 세포 활동을 비침습적으로 모니터링할 수 있습니다. 이 다용도의 통합 덕분에 EGFP-DTR-Luciferase 마우스 모델은 세포 기능, 질병 메커니즘 및 약물 작용 메커니즘을 이해하는 데 강력한 도구가 됩니다. 이러한 DTR 계열은 특정 면역 세포 집단의 표적 제거가 필요한 연구에서 점점 더 중요한 역할을 하고 있습니다. 이러한 DTR 모델은 단클론 항체가 일반적으로 표적하는 세포 표면 마커가 없는 계열의 제거에 특히 유용하며 면역 요법에 대한 반응을 개선하기 위한 매우 효율적이고 강력한 면역 세포 제거 옵션을 제공합니다.
FACS에 의한 비장 백혈구 서브집단 분석. 수컷 B-Foxp3-EGFP-DTR-Luc 마우스(n=3, 7개월령)에서 비장 세포를 분리하고 PBS 또는 DT(30 ng/kg 체중)를 2일 연속 주사한 후 흐름 세포 분석을 통해 비장에서 백혈구 서브집단을 평가했습니다. DT 주사 후 Treg 세포는 비장에서 현저히 감소했습니다.
B-Foxp3-EGFP-DTR-Luc 마우스 비장에서 EGFP 발현 분석(FACS). B-Foxp3-EGFP-DTR-Luc 마우스(n=3, 7개월령)에서 비장 세포를 분리하고 PBS 또는 DT(30 ng/kg 체중)를 2일 연속 주사한 후 흐름 세포 분석을 통해 T 세포 내 EGFP 발현을 평가했습니다. 단일 생세포 CD45+ 세포는 CD3+; CD19- T 세포 집단으로 게이팅되어 추가 분석에 사용되었습니다. DT 주사 후 비장에서 EGFP 신호는 급격히 감소했습니다.
DT 주사 후 동형접합체 B-Foxp3-EGFP-DTR-Luc 마우스의 BLI 분석. 동형접합체 B-Foxp3-EGFP-DTR-Luc 마우스에 PBS(n=3) 또는 DT(n=3)를 2일 연속 복강 내 주사하고 마취하에 생물 발광 이미징을 실시했습니다. 마우스는 150mg/kg의 D-Luciferin 칼륨 염을 복강 내 주사한 후 10분 후 IVIS Lumina LT Inst Series III 이미징 시스템으로 촬영되었습니다. 생물 발광 이미징은 Treg 세포 추적에도 사용될 수 있습니다.
흐름 세포 분석에 의한 비장 내 백혈구 서브집단 비율. C57BL/6 및 B-Ncr1-EGFP-DTR-Luc 마우스(n=3, 9주령)에서 비장 세포를 분리하고 흐름 세포 분석을 통해 백혈구 서브집단의 비율을 평가했습니다. B-Ncr1-EGFP-DTR-Luc 마우스에서 T 세포, B 세포, NK 세포, 수지상 세포, 과립구, 단핵구 및 대식세포의 비율은 C57BL/6 마우스와 유사했습니다. B-Ncr1-EGFP-DTR-Luc 마우스의 혈액 및 림프절의 백혈구 서브집단 비율도 야생형 C57BL/6 마우스와 유사했습니다(데이터는 제공되지 않음). 값은 평균±SEM으로 표시됩니다.
흐름 세포 분석에 의한 비장 내 NK 세포의 EGFP+ 세포 비율. 야생형 C57BL/6 마우스(+/+) 및 B-Ncr1-EGFP-DTR-Luc 마우스(Mut/+)(n=3, 8-9주령)에서 비장 세포를 분리하고 PBS 또는 DT(50ng/kg 체중)를 4일 연속 주사한 후 흐름 세포 분석을 통해 NK 세포 내 EGFP+ 세포 비율을 평가했습니다. DT 주사 후 B-Ncr1-EGFP-DTR-Luc 마우스에서 NK 세포 내 EGFP 비율이 감소했습니다.
