紹介

인간화 마우스를 사용하는 다양한 응용 시나리오에 적합하게, 전체 게놈 인간화 마우스 모델은 연구자들 사이에서 점점 더 신뢰받고 선호되고 있습니다. 이러한 모델은 인간에 가까운 유전자 발현을 보이며 성공률이 높고, 소분자 핵산 약물의 약리학적 연구에 매우 중요합니다.

현재 기술이 직면한 문제는 무엇인가요?

많은 유전자들이 큰 스팬을 가지고 있으며, 100kb 또는 200kb를 초과합니다. 이러한 유전자를 기존의 수정란 기반 CRISPR 기술(최대 20kb 편집) 또는 배아 줄기 세포 기반 재조합 기술(최대 30kb 편집)을 사용하여 타겟팅하는 것은 큰 도전 과제입니다.

BAC 트랜스제닉 기술은 200kb 이상의 큰 인간 유전자 조각을 마우스에 전달할 수 있지만, 이 마우스들은 마우스의 동원 유전자를 제거하지 않으며, 품종 구축에 시간이 많이 소요되어 과학 연구의 빠르게 증가하는 요구에 맞추지 못하고 있습니다.

Biocytogen이 개발한 EGES의 장점은 무엇인가요?

Biocytogen이 개발한 EGES(배아 줄기 세포 기반 EGE 기술)는 CRISPR-Cas9과 마우스 배아 줄기 세포(ES 세포)를 사용하여 초장기 DNA 조각을 타겟팅합니다. 이 기술은 마우스 ES 세포에서 큰 유전자 조각의 재조합 능력을 효과적으로 결합하고, CRISPR/Cas9에 의한 DNA 이중 나선 절단 후 효율적인 DNA 재조합 복구 메커니즘을 이용합니다.

현재 이 기술은 약 150kb의 유전자 조각을 타겟팅하는 데 성공했으며, 이 능력을 170kb까지 확장하려는 노력이 진행 중입니다.

타겟팅 전략 도식

이 기술은 배아 줄기 세포를 기반으로 하여 ES 세포 재조합 기술의 기술 프로세스와 시간표를 모방합니다. 유일한 차이점은 타겟팅 벡터가 외부에서 선형화할 필요가 없다는 점입니다. 타겟팅 벡터와 sgRNA 플라스미드를 동시에 줄기 세포에 전기 천공한 후, 양성 클론을 선별합니다. 전체 프로젝트는 양성 헤테로접합 마우스를 얻는 데 약 12개월이 소요됩니다.

EGES 기술 워크플로우