Biocytogen은 MOG 유도 EAE 질환 모델을 구축하여 다발성 경화증 관련 약물 효능 평가에 사용할 수 있습니다.
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다발성 경화증(MS)은 중추신경계의 만성 염증성 질환으로, 뇌염과 탈수초를 유발할 수 있습니다. MS는 자가면역질환으로 간주되며, 근육 경직이나 마비, 시각 장애나 실명, 감각 상실, 운동 실조 등의 증상을 나타내며, 재발을 반복하는 특징을 가지고 있습니다. MS에는 다양한 동물 모델이 있으며, 그 중 실험적 자가면역성 뇌척수염(EAE) 모델은 MS와 유사한 염증 및 탈수초의 병리학적 특징을 갖고 있기 때문에 MS 연구에서 널리 사용되고 있습니다.
마우스와 쥐 등의 설치류에서는, 척수 균질체, 정제된 수초, 수초 단백질(수초 기질 단백질 MBP, 보호지질 단백질 PLP, 수초 소수성 단백질 MOG)이나 이러한 단백질의 펩타이드를 사용하여 EAE 모델을 생성할 수 있습니다. 이는 수초 특이적인 T세포가 말초에서 활성화되어 혈액뇌장벽을 넘어 중추신경계로 침투하고 재활성화되어 염증 반응의 연쇄를 일으켜 탈수초 및 축삭 세포의 아폽토시스를 촉진하여 결국 신경 손상과 기능 상실을 유발하는 것으로 생각됩니다. 임상 증상은 표준화된 점수 시스템을 사용하여 평가하며, 병리학적 조직 절편에서 국소적인 탈수초와 염증성 백혈구의 침투가 시각적으로 확인됩니다.
Biocytogen은 MOG 유도 EAE 질환 모델을 확립하여 MS 관련 약물의 효과 평가에 사용될 수 있습니다.
모델 생성 방법: 동물은 0일째에 MOG35-55/CFA 유제를 옆구리(파란 점) 또는 목과 엉덩이(빨간 점)에 피하 주사하고, MOG35-55/CFA 유제 주사 후 2시간 및 24시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 마우스에 투여합니다. 체중과 EAE 점수는 2일마다 기록합니다. 실험 종료 시 척수의 요추 확장부를 수집하여 H&E 및 LFB 염색을 수행합니다.
동물: C57BL/6, B-hCD40hFcRn 마우스, 8-10주령, 암컷
검출 지표: 체중 및 임상 점수(2일마다), H&E, Luxol Fast Blue(LFB) 염색
| Readout | ||
| Included tests | Phenotype | Body weight |
| Clinical score | ||
| Histopathology | H&E; LFB | |
| Optional tests | Tissue homogenate | Cytokines analysis |
| Peripheral blood flow cytometry | Flow cytometry assay | |
| Score | Symptoms | Description |
| 0 | Normal | Hold mouse by the base of the tail. Unaffected, mouse can "helicopter" tail. |
| 0.5 | Tail limpness | Hold mouse by the base of the tail. Some loss of tail tone. |
| 1 | Hold mouse by the base of the tail. Complete tail limpness, with no evidence of limb weakness. | |
| 1.5 | Limpness | No hind limb paralysis, but the hind limbs fail when ambulating on the lid metal grid. |
| 2 | Gait irregularities. Hold mouse by the base of the tail, the hind limbs are curled up. Or mouse's head is tilted, it can't keep balance with no hind limb paralysis. |
|
| 2.5 | Hind limbs paralysis | Partial paralysis of hind limbs, waddles upon ambulation, but does not drag limbs. Or mouse's head is tilted, and it keep fall down with no hind limb paralysis. |
| 3 | Partial paralysis of hind limbs as evidenced by dragging one limb upon ambulation. | |
| 3.5 | Forelimbs paralysis | Complete paralysis of both hind limbs, dragging body by forearms, still capable of moving around the cage. |
| 4 | Responsive but not moving/stationary, listless, rapid breathing (consult institutional veterinarian, consider euthanasia). | |
| 4.5 | Dead | Immobile and unresponsive, moribund (immediate euthanasia recommended). |
| 5 | - |
| Group | Onset (day) | Peak (day) | Incidence |
| G1: C57BL/6J |
12 | 16 | 5/5 |
| 12 | 16 | ||
| 14 | 17 | ||
| 12 | 16 | ||
| 12 | 16 | ||
| G2: C57BL/6N |
14 | 18 | 5/5 |
| 12 | 14 | ||
| 14 | 18 | ||
| 14 | 16 | ||
| 14 | 18 |
그림 1. MOG35-55 유도 EAE. C57BL/6J 및 C57BL/6N (A, B) 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제를 목과 엉덩이(C)에 피하 주사합니다. MOG 주사 후 2시간 및 24시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. 체중과 임상 점수는 2일마다 기록됩니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, n=5.
항CD40의 MOG35-55 유도 EAE에 대한 효과. 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제(피하 주사)를 옆구리(파란 점)에 주사하고, MOG 주사 후 2시간 및 48시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. 0일, 4일, 8일에 동종형 대조군 또는 항CD40을 투여합니다. (A) 체중 (B) 임상 점수 (C)는 2일마다 기록됩니다. H&E 및 LFB 염색을 통해 척수의 면역 세포 침투와 탈수초를 평가합니다(D). 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001로 나타냅니다.
항CD40L의 MOG35-55 유도 EAE에 대한 효과. 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제(피하 주사)를 목과 엉덩이(빨간 점)에 주사하고, MOG 주사 후 2시간 및 48시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. G3(동종형 대조군) 또는 G4(항CD40 항체)를 2주 간격으로 투여합니다. 체중(A) 및 임상 점수(B)는 2일마다 기록됩니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001로 나타냅니다.
항CD40L 항체(내부 개발된 아날로그)는 EAE의 임상 증상을 개선하고 염증과 탈수초를 제어합니다.
B-hCD40/hCD40L 마우스의 척수는 30일째에 절제하여 Luxol Fast Blue(LFB)(A) 또는 Hematoxylin and Eosin(H&E)(B)으로 염색되었습니다. 대표적인 절편이 나타납니다. 척수의 염증 세포 및 탈수초 점수(C&D). 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001로 나타냅니다.
항CD40L의 MOG35-55 유도 EAE에 대한 효과. 마우스는 0일째에 MOG35-55 유제(피하 주사)를 목과 엉덩이(빨간 점)에 주사하고, MOG 주사 후 2시간 및 48시간 후에 PTX(복강 내 주사)를 투여합니다. 항CD40 항체 또는 동종형 대조군은 2주 간격으로 투여됩니다. 연구 종료 시 혈청을 수집하여 사이토카인 수준을 평가합니다. 데이터는 평균 ± 표준오차(SEM)로 표시되며, n=6. G2와 비교하여 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001, ****p<0.0001로 나타냅니다.
